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哺乳動物細(xì)胞基因編輯

CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)的出現(xiàn)為哺乳動物模型構(gòu)建提供了簡便、快速的方法，也為基因疾病的治療提供新思路、新方法。泓迅生物繼質(zhì)粒DNA后全新推出CRISPR RNP介導(dǎo)的細(xì)胞基因編輯服務(wù)：平臺依托先進(jìn)的技術(shù)和經(jīng)驗豐富的科研團(tuán)隊，為您打造從方案設(shè)計、sgRNA設(shè)計及化學(xué)合成、高活性重組Cas9蛋白，RNP復(fù)合物組裝到敲除細(xì)胞系構(gòu)建的全流程服務(wù)。

服務(wù)優(yōu)勢

全模式物種CRISPR sgRNA設(shè)計
sgRNA化學(xué)合成純度高達(dá)99%以上
重組Cas9蛋白純度高達(dá)99%以上
最快至2周交付

服務(wù)詳情

服務(wù)項目	交付內(nèi)容	交付周期
方案設(shè)計	專業(yè)的分析報告設(shè)計序列	咨詢
合成與組裝	化學(xué)合成修飾化的sgRNA 高活性、高純度的Cas9蛋白 RNP復(fù)合物組裝	咨詢
敲除細(xì)胞系構(gòu)建	多克隆細(xì)胞群或單克隆細(xì)胞株提供細(xì)胞基因型復(fù)檢、擴(kuò)增及凍存	咨詢
驗證	DNA水平檢測蛋白水平檢測	咨詢

在線咨詢

服務(wù)流程

案例分享查看詳細(xì)

1、利用RNP下的雙sgRNA編輯法，實現(xiàn)基因DNA水平片段敲除
案例：對X細(xì)胞的A基因進(jìn)行Exon1-13的片段敲除（KO）
（1）在需求敲除片段兩端分別設(shè)計1條高靶向的sgRNA序列，如下圖：
gene KO

（2）將gRNA-A1、gRNA-A2進(jìn)行化學(xué)修飾合成后分別與Cas9蛋白組裝成RNP，轉(zhuǎn)染至X細(xì)胞進(jìn)行A基因片段序列敲除；

（3）敲除結(jié)果檢測如下：
DNA水平-Sanger測序顯示，A基因序列已被敲除，結(jié)果如下：

細(xì)胞表型檢測如下圖：A為正常細(xì)胞，B為A基因敲除后的突變細(xì)胞形態(tài)，表明A基因被敲除。
RNP基因敲除

2、RNP敲除效率遠(yuǎn)超傳統(tǒng)質(zhì)粒法
案例：以AAVS1位點敲除為例，比較質(zhì)粒（DNA）與RNP的敲除效率
（1）將AAVS1-sgRNA1序列構(gòu)建帶有Cas9的載體中，轉(zhuǎn)染細(xì)胞后提取基因組DNA，以基因組DNA為樣本進(jìn)行Sanger測序并結(jié)合Synthego ICE分析軟件檢測，結(jié)果顯示敲除率為14%；